Рецептор домена 1 за дискоидин као нови ген осетљивости на шизофренију | молекуларна психијатрија

Рецептор домена 1 за дискоидин као нови ген осетљивости на шизофренију | молекуларна психијатрија

Anonim

Апстрактан

Докази указују да би мијелинске мијене могле предиспонирати шизофренију. Уочена је смањена експресија неколико мијелинских гена код пацијената са шизофренијом. Недавно смо идентификовали рецептор домена 1 за дискоидин ( ДДР1 ; смештен на хуманом хромозому 6п21.3) као мијелински ген у моделу миша и у људској ћелијској олигодендроглиалној линији. У овој студији смо прегледали да ли у нуклеотидних полиморфизама (СНПс) постоји ДНК од 100 пацијената са шизофренијом. Идентификовали смо нову мутацију унутар егзона 10 која производи аминокиселинску супституцију Н502С у а-д изоформама и М475В у е изоформи. Међутим, учесталост мутације (2%) била је слична код пацијената са шизофренијом и код контролних испитаника. У процени контролног случаја са 389 пацијената са шизофренијом и 615 контрола, идентификовали смо један СНП (СНП9, рс1049623) повезан са шизофренијом (омјер коефицијента = 1, 44, интервал поузданости 95%: 1, 15–1, 79, прилагођени П = 0, 0016). Ово повезивање је потврђено анализом хаплотипа; СНП-ови 9–10–11 (рс1049623, рс2267641 и рс2239518) хаплотип остају значајни чак и након прилагођавања за вишеструко тестирање (прилагођено П = 0, 0136). Треба приметити снажну родну зависност у асоцијацији, односно статистички значај ограничен на мушкарце (прилагођени П- вредност = 0, 0002). Регресијска анализа експресије мРНА ДДР1 у лимфоцитима периферне крви код пацијената са шизофренијом показала је да је присуство алела Г значајно смањило релативни број копија мРНА на начин који зависи од дозе ( П = 0, 003). Ови подаци сугерирају да хаплотип ризика означава варијанту која дјелује на цис, укључену у систем регулације транскрипције гена. Закључно, предлажемо ДДР1 као нови ген осетљивости на шизофренију.

Увод

Шизофренија је сложен поремећај мозга који погађа отприлике 1% опште популације у целом свету. Иако се зна да генетски фактори играју важну улогу, још увек није утврђен опште прихваћени модел патогенезе ове болести. Скенирање повезаности генома и испитивања генетске асоцијације идентификовали су неколико, прилично широких, хромосомских региона као места потенцијалних гена осетљивости на шизофренију. 1 Једна од три најбоље подржане регије је 6п24–21; 2 хромозомска регија која садржи главни комплекс хистокомпатибилности И (МХЦ И) и једну од најгушће генских области људског генома. Нађено је да је неколико генских локуса у овој регији вероватно повезано са шизофренијом. То су дисбиндин 1 ( ДТНБП1, 6п22.3), 3 мијелин олигодендроцитни гликопротеин ( МОГ, 6п22.1 ), 4 фактор некрозе тумора алфа ( ТНФ-α, 6п21.3 ), 5, промоторски полиморфизам фактора некрозе тумора алфа (ТНФ-алфа) ген код јапанских болесника са шизофренијом. Ј Неурал Трансм 2004; 111: 217–221. "Хреф = / артицлес / 4001995 # реф6 ариа-лабел =" Референце 6 "дата-трацк = кликните дата-трацк-лабел = линк> 6, 7 нотцх типе-4 рецептор ( НОТЦХ4, 6п21. 3 ) 8, 9, 10, 11, 12 и тенасцин Б ( ТНКСБ, 6п21.3 ) 13 Међу њима је ДТНБП1 ген који се најконзистентније реплицира и позитивни налази су добијени у независним подацима, иако ниједан појединачни хаплотип нема Показало се да су заједничке за све узорке. 3 Патогене мутације још нису идентификоване, али примећено је да су хаплотипи ризика повезани са смањеним нивоом експресије ДТНБП1 мРНА у мозгу.

Хромозомска регија 6п21.3 садржи друге могуће гене кандидаткиње за шизофренију, укључујући локус који кодира рецептор 1 домена дискоидина ( ДДР1 ). Овај рецептор припада ДДР подскупини рецептора тирозин киназе и одликује се изванстаничним доменом хомологним лектином дискоидин-И који веже угљене хидрате у Дицтиостелиум дисцоидеум. 15 Дискоидински домен хомологије такође је присутан у неколико протеина везаних мембраном и излучених. Међу њима су неуропилини и протеин 1 и 2 повезани са контактином, који учествују у развоју нервног система 17, 18 и ген КСЛРС-1 који, када мутира, изазива ретинохизу наследне болести код људи Кс. 19 Колаген је јединствени ДДР1 лиганд који је до сада идентификован и након везивања за рецептор следи веома спору кинетику активације. 15 Идентификовано је пет изоформи ДДР1 генерисаних алтернативним спајањем; 20 номенклатура која укључује суфиксе а –е. ДДР1 се свеприсутно експримира у ниским нивоима у различитим епителним ткивима (нпр. У срцу, плаценти, мишићима, бубрезима и панкреасу) и са високим нивоом експресије у мозгу. 15 Значајно је прекомерно изражен у неколико тумора, нарочито код карцинома дојке, јајника и мозга. Студије хибридизације ин ситу на мишевима показале су експресију ДДР1 у централном нервном систему (ЦНС) у ембрионалним фазама, као и у одраслој доби, нарочито у пролиферацији неуроепителиозе. 21, 22 У ЦНС се показало да је сигнализација колагена-ДДР1 од суштинског значаја за формирање гранула неурон-аксона. 23 Поред тога, извештавали смо о експресији ДДР1 у олигодендроцитима током развоја мозга миша и у људској ћелијској линији олигодендроглија; ови подаци пружају доказ потенцијалне укључености ДДР1 у процес мијелинације. 24

Класично, испитивање шизофреније има тенденцију усмерености на функцију неурона, али све чешће се добијају подаци који подржавају хипотезу да су олигодендроцити беле материје такође важни у развоју болести. 25, 26, 27, 28, 29

С обзиром на хромозомску локализацију ДДР1, заједно с његовом претпостављеном улогом у развоју ЦНС-а и у функцији олигодендроцита, оценили смо ДДР1 као кандидат-ген за шизофренију. У овом истраживању иницијално смо извршили мутацијски скрининг директним секвенцирањем кодирајућих подручја ДДР1 код 100 пацијената са шизофренијом. Потом смо тражили доказе за повезаност локуса ДДР1 и шизофреније у великом узорку шпанске популације који контролише случајеве. Затим смо измерили експресију мРНА у лимфоцитима периферне крви (ПБЛ) код 30 пацијената груписаних у складу са њиховим генотипом ДДР1 .

материјали и методе

Субјекти

Регрутовано је 1004 неповезаних бијелаца који су рођени у Шпанији. Истраживачки узорак популације састојао се од 389 пацијената са шизофренијом (252 мушкарца и 137 жена) из рефералне болнице Псикуиатриц Университари Институт Пере Мата (Реус, Шпанија) и 615 контролних особа (321 мушкарац и 294 жена). Просечна старост болесника била је 51, 4 године (распон: 19–88), а просечно трајање болести било је 27 година (распон: 1–64). Сви случајеви испуњавали су ДСМ-ИВ критеријуме за дијагнозу шизофреније, а шизофактивни поремећај је искључен. Најмање двојица психијатара оцењивали су пацијенте регрутоване између 1996. и 1998., а међу њима је постигнут консензус о дијагнози. Пацијенти регрутовани у периоду од 2001. до 2004. године оцењени су према распореду клиничке процене у неуропсихијатрији (СЦАН). 30 Подаци из породичне историје психозе код рођака првог степена, ток болести, тип почетка и превладавајућа симптоматологија дихотомизирани су да би се олакшала накнадна статистичка анализа, као што је описано на другом месту. 31

Контролне особе су регрутоване из центара за основну његу на истом географском подручју као и реферална болница. Средња старост је била 43, 1 година (распон: 18–75). Скривање на психијатријске болести извршено је према 28-скалираном глобалном здравственом упитнику (ГХК) 32 и интервјуу који је спровео лекар како би се пружила потпуна медицинска историја и детаљи о животном стилу, навикама и антецедентима. Болести су евидентиране према Међународној класификацији болести верзија 9 (ИЦД9). Само неповезани грађани који нису имали личну историју психијатријске болести и ГХК оцена <7 разматрани су за укључивање у студију. Проценат искључених учесника био је независно од пола.

Студија је у складу са смерницама Медицинско-етичке комисије сваке од институција које учествују у раду. Обавезна сагласност добијена је од свих учесника и загарантована је анонимност података.

ДНК екстракција

Геномска ДНК припремљена је из узорака венске крви коришћењем комплета за пречишћавање Пурегене ДНА (Гентра Системс, Барселона, Шпанија). ДНК је разблажена до концентрације 50 нг / μл , осим ако није другачије назначено.

Изолација и крио конзервација ПБЛ

Лимфоцити су изоловани из хепаринизоване свеже крви помоћу Фицолл-Пакуе реагенса (Амерсхам Биосциенцес, Барселона, Шпанија) у року од 6 х од вађења крви. ПБЛ са градијентом густоће ресуспендиран је у феталном говеђем серуму са 10% диметилсулфоксида (Сигма-Алдрицх, Мадрид, Шпанија). Аликвоти ћелијске суспензије пренесени су у криотубе, замрзнути преко ноћи брзином од 1 ° Ц / мин у замрзивачу на -80 ° Ц и пребачени у року од 24 сата у замрзивач на -150 ° Ц. Ћелије су одмрзнуте за употребу у присуству ТРИзол реагенса (Инвитроген, Барцелона, Шпанија), као што је касније описано.

Идентификација мутације

За дизајнирање прајмера помоћу софтвера Пример3 кориштен је ДДР1 генски низ АЦ004211.1. 33 Узорак за мутирање скрининга кодирајућих региона састојао се од 100 насумично одабраних пацијената са шизофренијом (53 мушкарца и 47 жена). Концентрација геномске ДНК мерена је у три примерка коришћењем Пицогреен флуоресцентног теста у складу са протоколом произвођача (Молецулар Пробес, Барцелона, Шпанија). Узорци су комбиновани у базенима од 10 до крајње концентрације од 2, 5 нг / μл . ДНК базени су амплификовани ПЦР-ом и ампликони су секвенционисани у оба смера коришћењем ДИЕнамиц ЕТ Терминатор Цицле Секуенцинг Кит и МегаБАЦЕ1000 секвенцера, према упутствима произвођача (Амерсхам Биосциенцес, Барселона, Шпанија). Хроматограми су анализирани програмом Секуенцхер (корпорација Гене Цодес, Анн Арбор, МИ, САД). Када је откривена сумњива мутација, свих 10 појединачних узорака који су чинили секвенце појединачно су секвенционирани. Детаљи о маркерима и ПЦР условима доступни су на захтев одговарајућег аутора. Мутациона номенклатура коју су описали ден Дуннен и Антонаракис 34 коришћена је за означавање мутација.

СНП генотипизација

Укупно 22 појединачна нуклеотидна полиморфизма (СНП) који обухватају> 20 кб у ДДР1 локусу изабрана су између оних идентифицираних у мутацијској скрининг анализи и из базе података Целера (//ввв.целерадисцоверисистем.цом). Међутим, само 15 (8 плус 7) одговара условима које намеће систем анализе (види доле). Додатни СНП је укључен из суседног гена ГТФ2Х4 (слика 1).

Image

Релативни положај 16 СНП одабраних у хуманом ДДР1 за анализу хаплотипа и ЛД блокова око гена. ( а ) Релативни положај 16 СНП-а на геномској структури ДДР1 према бази података Вега Сангер. За ГТФ2Х4 је приказан само ексон 1. Имајте на уму да СНП7 није раније пријављен. Подвучени СНП откривени су током мутацијске анализе ДДР1 . Отворене и засјењене кутије означавају 5 ′ и 3 ′ некодирајуће регије и ексоне, респективно. ( б ) ЛД граф сегмента од 40 кб око ДДР1 . Подаци су добијени из ХапМап фазе ИИ и анализирани са Хапловиевом. Комплетна регија смештена је у блок хаплотипа, према дефиницији Габриел ет ал. 57 и према дефиницији Хапловиев-а. Квадрати представљају р 2 вредности, а веће вредности су представљене као тамнији квадрат. СНП укључени у ову студију су подебљани.

Слика пуне величине

Генотипизација је изведена коришћењем система МассАРРАИ према упутствима произвођача (Секуеном Инц., Сан Диего, ЦА, САД) као што је претходно описано. 35 Дизајн теста и услови ПЦР-а доступни су на захтев одговарајућег аутора. Као контрола квалитета, СНП рс1049628 је генотификован два пута користећи два различита испитивања. Усклађеност је била 100%.

Да би се проверио доказ примене популације на нивоу генома, анализирано је 25 СНП-ових маркера који нису повезани геном, сви са малом фреквенцијом алела> 10%, у ДНК свих учесника који су користили пробаву рестриктивним ензимом ПЦР производа, праћено гел анализом. Детаљи о маркерима и ПЦР условима доступни су на захтев одговарајућег аутора.

Квантификација експресије ДДР1 помоћу РТ-ПЦР у стварном времену

Укупна РНА је екстрахована помоћу ТРИзол реагенса (Инвитроген, Барцелона, Шпанија) из смрзнутог ПБЛ. Изабрано је десет пацијената са шизофренијом из сваког од три генотипа СНП9; 20 мушкараца и 10 жена. Чистоћа и концентрација РНА процењени су релативном спектрометријском апсорпцијом на 260/280 нм. Људски мозак полиА + РНА купљен је од Цлонтецх-а (БД Биосциенцес, Барселона, Шпанија) као базен читавих мозгова од три нормална мушкарца (просечна старост 55, 6 година) и три нормалне жене (просечна старост 46 година), белцима чија смрт је проузрокована траума. Један микрограм укупне РНА или 1 нг полиА + РНА је реверзно транскрибован у цДНА коришћењем случајних хексамера и СуперСцрипт ИИ Рнасе Х - реверзна транскриптаза према упутствима произвођача (Инвитроген, Барцелона, Шпанија). Експресија мРНА ДДР1 квантификована је квантитативним ПЦР-ом у реалном времену употребом система детектора секвенцијалног детектора АБИ Присм 5700 (примењени биосистеми, Барселона, Шпанија) у комбинацији са системом за детекцију са двоструким обележавањем ТакМан (Апплиед Биосистемс, Барцелона, Шпанија) на основу 5 'нуклеазни тест. Као интерна контрола коришћена је 18С РНА. ТакМан прајмери ​​и сонде за ДДР1 и 18С РНА су добијени од унапред дизајнираних производа Ассаи-он-Деманд (Апплиед Биосистемс, Барцелона, Шпанија) и потврђени. ПЦР амплификације изведене су у три примерка са узорцима цДНА у запремини од 25 μл . Експресија мРНА ДДР1 за сваки узорак израчуната је коришћењем 2 -ΔΔ Ц т методе према упутствима произвођача (Апплиед Биосистемс, Барцелона, Шпанија). Количине транскрипта ДДР1 у сваком узорку израчунавају се у односу на нивое у базену калибратора и су бездимензијски бројеви.

Статистичка анализа

Процјене равнотеже Харди-Веинберга, неједнакости равнотеже везе (ЛД) и тестови алелних асоцијација за поједине СНП израчунати су помоћу Хапловиев 3.0. 36 ЦОЦАПХАСЕ 37 коришћен је за процену фреквенција хаплотипа помоћу алгоритма ЕМ и за тестирање асоцијације хаплотипа. За анализу хаплотипа анализирали смо три маркерна хаплотипа из суседних СНП-а коришћењем технике 'клизног прозора'. Прије примене теста групирани су заједно хаплотипови на фреквенцијама <5%. Корекција за вишеструко тестирање извршена је поређењем неприлагођених П- вредности са расподјелом најбоље- П- вриједности за било који СНП након 100 000 пермутација; ознаке 'цасе' и 'цонтрол' насумично су додељене стварним подацима помоћу Хапловиев-а. Пошто се пермутације дешавају на нивоу генотипа, у пермутацијском тесту имплицитно се разматрају ЛД односи међу СНП-овима. Исти поступак је изведен користећи ЦОЦАПХАСЕ за подешавање П- вредности најбољег резултата у случају хаплотипова, након 10 000 пермутација. За тестирање стратификације становништва коришћен је програм СТРУЦТУРЕ 2.0 38 . НетГене2 Сервер 39 и Сплице Сите Предицтион би Неурал Нетворк 40 коришћени су за предвиђање да ли су идентификоване мутације креиране нове локације за спајање. Регресијска анализа коришћена је за поређење нивоа мРНА између група помоћу СПСС програма (верзија 13.0).

Резултати

Мутациона анализа ДДР1 код шизофреније

Да бисмо идентификовали уобичајене варијанте секвенци гена ДДР1, секвенционирали смо кодирајуће регионе и границе егзона-интрона ДДР1 у 10 базе ДНК из узорака крви 100 несродних шизофрених пацијената. Идентификовано је шеснаест СНП-а и једно брисање од 2 бп. Од тога је 10 пријављено у јавним базама података (дбСНП), а седам је било нових (Табела 1). Од 10 СНП-ова смештених у егзонима, само 2 у егзону 10 резултирало је несинонимним полиморфизмима, зависно од ДДР1 изоформе. СНП6 (рс1264319) не утиче на кодни потенцијал изоформе а-д, али ствара проституцију супституције леуцином на положају 469 изоформе е (ДДР1е П469Л). СНП7 (г21720691А> Г) резултира променом аспарагина на серин на положају 502 изоформ а-д (ДДР1а-д Н502С) и метионина да се валин на положају 475 изоформе е (ДДР1е М475 В). Ова варијанта има веома ниску учесталост алела од око 2%, а слична је код пацијената и контролних субјеката. У читавом узорку студије није примећен хомозигот за ретки Г алел. Усклађивање секвенци људи, штакора и миша показало је да је очуван Н502. Излоци 10, 11 и 12 кодификују јуктамембрански део рецептора, и који садржи консензусну секвенцу НПКСИ за фосфорилацију тирозина која је укључена у трансдукцију сигнала рецептора. Ни четири СНП-а идентификована у границама егзона-интрона нити брисање 2 бп не стварају нова места за спајање.

Табела пуне величине

ДДР1 хаплотип ефекти на ризик од шизофреније

Да бисмо проценили да ли је постојао генотип или хаплотип ефекат ДДР1 на ризик од шизофреније, урадили смо студију удруживања у случају контроле. Укључили смо укупно 16 СНП-а који имају распон> 20 кб у ДДР1 региону, од којих је осам идентификовано у мутацијском скринингу ДДР1 код шизофреније, а осам изведених из дбСНП (седам покрива крај ДДР1 5 'и 3' гена и један СНП у суседном гену ГТФ2Х4, види слику 1). СНП1 није укључен у статистичку анализу јер позивање алела није достигло 85%. СНП12 је био мономорфан у нашем узорку студије и такође је искључен из статистичке анализе. Сви СНП-ови укључени у анализу били су у равнотежи Харди-Веинберг (подаци нису приказани). Примећен је снажан ЛД ( Д '0, 05) између свих маркера са алелним фреквенцијама> 0, 05. Учесталости алела изведених из 16 полиморфизама приказане су у Табели 2. Након прилагођавања за вишеструко тестирање пермутацијском анализом (100 000 пермутација) само СНП9 (рс1049623) остао је статистички сигнификантно (прилагођен П = 0, 013) (Табела 2). Коефицијент квоте (ОР) за СНП9 био је 1, 44 и интервал поверења од 95% (ЦИ): 1, 15–1, 79 ( П = 0, 0016). Треба напоменути да је постојао ефекат зависан од дозе између СНП9 и шизофреније, односно да су испитаници ГГ хомозиготе имали ОР = 2, 26 (95% ЦИ: 1, 30–3, 91), испитаници са ГА хетерозиготом имали су ОР = 1, 34 (95% ЦИ: 1, 00 –1, 79); за претпоставку да је за субјекте хомозиготе АА ОР 1.

Табела пуне величине

Затим смо проценили хаплотипове и урадили анализу асоцијације са три узастопна СНП-а користећи приступ 'клизног прозора'. Табела 3 сумира П- вредности и прилагођене П- вредности најбољих резултата у тесту вероватноће хомогености. Неприлагођене П- вредности биле су <0, 05 за три хаплотипа (СНП4-СНП5-СНП6, СНП8-СНП9-СНП10, СНП9-СНП10-СНП11), а статистички су најзначајнији 9–10–11. Овај значај је остао и након прилагођавања за вишеструко тестирање (прилагођено П = 0, 0136). Процењене фреквенције хаплотипа у прозору СНП-а 9–10–11 приказане су као Допунски материјал (СМ Табела) на крају текста.

Табела пуне величине

Да бисмо искључили могућност да је позитивна повезаност настала због генетске стратификације међу пацијентима и контролним субјектима, извршили смо генетску анализу стратификације према методи Притцхард-а. 37 Употребом 25 независних би-алелних маркера са малим фреквенцијама алела> 10%, нисмо успели да откријемо генетску стратификацију (подаци нису приказани).

Поновили смо анализе удруживања стратификације узорка по сполу. Поређење између мушких подскупина показало је значајнију повезаност између СНП9 и шизофреније него у укупном узорку студије (учесталост алела Г у случајевима 0, 323 наспрам 0, 190 у контролисаним, подешено П- вредност <0, 00001, ОР = 2, 03, 95% ЦИ: 1, 51 –2, 73). На нивоу хаплотипа, прозор 9–10–11 је, опет, био најзначајнији резултат (прилагођен П = 0, 0002). Супротно томе, није било значајних разлика између женских случајева и контрола ни у једном СНП-у или хаплотипу ( П- вредност = 0, 426 за СНП9, учесталост алела Г 0, 225 у односу на 0, 252 у случајевима и контрола, респективно). Коначно, проценили смо утицај СНП9 на клиничке променљиве у групи пацијената и нисмо утврдили статистички значајне асоцијације.

Анализа експресије мРНА ДДР1 у ПБЛ

До данас је било мало података о експресији ДДР1 у људском мозгу. Стога смо испитали нивое експресије ДДР1 у људском мозгу и ПБЛ користећи РТ-ПЦР у стварном времену помоћу теста који детектује све ДДР1 изоформе. Количина ДДР1 мРНА копија у групи полиА + РНА из мозга била је 18 пута већа него у мРНА из ПБЛ добијена од контролних учесника ( П = 0, 0001) (Слика 2а). Замрзнути узорци ПБЛ код 30 пацијената са шизофренијом груписани су према генотипу СНП9 и измерене су копије мРНА ДДР1 (слика 2б). Линеарна регресијска анализа, са полном, старосном и СНП9 генотипом као независним варијаблама, показала је значајну повезаност ДДР1 експресије и СНП9 генотипа ( П = 0, 003). Иако је код мушкараца постојао тренд ка нижем нивоу експресије ДДР1 , род није ушао као статистички значајна варијабла у једначину ( П = 0, 085). Доб није био повезан са ДДР1 експресијом ( П = 0, 152). Пацијенти са схизофренијом хомозиготни за алел СНП9 Г имали су смањену експресију ДДР1 у поређењу са онима који су били ГА хетерозиготни и који су заузврат имали мање од оних који су били хомозиготни АА ( П = 0, 003) (Слика 2б).

Image

Релативна ДДР1 мРНА експресија мерена РТ-ПЦР у реалном времену. ( а ) Експресија мРНА мозга ДДР1 у поређењу са ПБЛ. Читав мозак изражава 18 пута више ДДР1 мРНА од скупљене РНА из контролних лимфоцита ( П = 0, 0001). ( б ) Релативна експресија ДДР1 у ПБЛ РНА код пацијената са шизофренијом, одвојена према полу и генотипу СНП9. Свака појединачна вредност израчуната је у односу на средњу вредност АА хомозигота. Анализа линеарне регресије са полном, старосном и СНП9 генотипом као независним варијаблама показала је значајну повезаност ДДР1 експресије и СНП9 генотипа ( П = 0, 003). Иако су мушкарци показали тренд ка нижим нивоима изражености ДДР1 , родна варијабла није значајно ушла у једначину ( П = 0, 085). Доб није био повезан са ДДР1 експресијом ( П = 0, 152). Пацијенти са схизофренијом хомозиготни за алел СНП9 Г ( Н = 10) имали су смањену експресију ДДР1 у поређењу са онима који су били ГА хетерозиготи ( Н = 10) који су заузврат имали мање него они који су били хомозиготни АА ( Н = 10, П = 0, 003).

Слика пуне величине

Дискусија

У овој студији предлажемо ДДР1 као нови кандидатски ген за подложност шизофренији. Смештена у 6п21.3, мутациона анализа кодирајућег региона гена у ДНК код 100 пацијената са шизофренијом није открила ниједну претпостављену мутацију болести. Пронашли смо 17 полиморфизама: 10 СНП-ова је већ пријављено у јавним базама података, једно ново интроницно брисање од 2 бп и шест нових СНП-ова. Једине две мутације заблуде, обе смештене у егзону 10, имале су сличне учесталости алела и генотипа код пацијената са шизофренијом као у контролној групи испитаника. Ово запажање не искључује дефинитивно њихово учешће у патогенези шизофреније, али чини је мало вероватном. Мутација Н502С, међутим, заслужује даља испитивања како би се утврдило да ли може да има утицаја или на фосфорилацију тирозина у аминокиселинској позицији 513 или на конформацију протеина у суседном НПКСИ консензусном секвенцу за трансдукцију сигнала. Треба напоменути да је СНП9, ако је процењен независно од осталих идентификованих мутација, показао јасну повезаност доза-ефекат са шизофренијом (ИЛИ ГГ = 2, 26, 95% ЦИ: 1, 30–3, 91 и ОР АГ = 1, 34, 95% ЦИ: 1, 00– 1.79; уз претпоставку ИЛИ АА = 1). Овај резултат може се сматрати појачањем претпоставке да би ДДР1 могао бити прави ген подложности за болест, 41 према адитивном моделу. Приступ анализи хаплотипа „клизног прозора“ за три узастопна СНП-а потврдио је овај резултат; најјача асоцијација хаплотипа састављена од СНП-а 9, 10 и 11.

У нашем контролном узорку није примећена бруто генетска стратификација (процењена Притцхард методом) и овај налаз смањује могућност лажних позитивних резултата у нашим анализама. Морамо, међутим, имати на уму да с 25 СНП-а које смо користили неће бити откривен мањи степен стратификације.

Открили смо јасан генетски ефекат повезан са родом на повезаност са шизофренијом и који је био ограничен на мушкарце. Треба напоменути да је учесталост алела Г код СНП9 недовољно заступљена код контролних мушкараца у поређењу са контролним женама (0, 190 наспрам 0, 252), иако статистички није значајна (прилагођени П = 0, 0878). Генска повезаност са шизофренијом која је ограничена на један или други род је раније пријављена 42, 43, 44 и може бити повезана са родним специфичним разликама у самом фенотипу шизофреније. У Схифман ет ал. 43 (горе) такође су постојале разлике у фреквенцијама између контролних испитаника и мушкараца.

Позитивна повезаност ДДР1 са шизофренијом може бити последица ЛД између ДДР1 и других кандидатних гена на хромозому 6п, за које се извештава да су повезани са шизофренијом (тј. МОГ , ТНФ , НОТЦХ4 и МХЦИ локусом). Можемо претпоставити да повезаност коју смо детектирали није настала због ЛД-а ни у једном од ових других локуса, пошто је ДДР1 одвојен од одговарајућих блокова хаплотипа рекомбинацијским жариштима. 45 Штавише, није пронађено да МХЦИ локус (који је један од најкомплекснијих региона у погледу ЛД обрасца 46 и, стога, ЛД у овом региону може бити истражен само анализом густих маркера) повезан са шизофренијом у анализа која укључује узорак немачких пацијената погођених болешћу. 47

Анализа експресије у ПБЛ показала је да су пацијенти са генотипом СНП 9 ГГ ризика имали значајно смањене нивое ДДР1 мРНА. Овај налаз сугерира да функционална, још неидентификована, мутација утиче на регулаторни систем транскрипције смањујући транскрипцију или повећавајући брзину деградације мРНА или обоје.

Раније смо приметили да је код мишева експресија ДДР1 велика у олигодендроцитима и да има значајан значај током периода мијелина. 24 Ако се сличан образац експресије појави у људском мозгу, тада би ДДР1 могао да буде умешан у поремећаје мијелина који су примећени код шизофреније. 25, 48 Студије снимања мозга, као и пост мортем прегледи, показали су суптилне абнормалности код кортикалне и субкортикалне беле материје пацијената са шизофренијом. 49, 50, 51, 52 На молекуларном нивоу откривена је транскрипциона редукција регулисаних гена повезаних са олигодендроцитима и мијелином помоћу микроарраи анализа у префронталним узорцима кортекса код пацијената са шизофренијом. 53, 54, 55 Треба напоменути да су процеси мијелина који се јављају током касне адолесценције до ране одрасле доби (време највеће инциденције почетка шизофреније) концентрисани у предњем и темпоралном режњеву; регије мозга које су критичне за развој шизофреније. 26, 48 На пример, пацијенти са метахроматском леукодистрофијом, ретком урођеном болешћу формирања мијелина, често могу да се појаве са клиничким епизодама психоза, шизофреније и других сродних поремећаја током адолесценције и младости. 56

Укратко, представљамо нови кандидатски ген који предиспонира за шизофренију, ген ДДР1 , смештен на хромозому 6п21.3. Представили смо податке који указују на повезаност између ДДР1 и шизофреније која је изразита код мушкараца. Основни механизам је неизвестан, али вероватно, то је путем једног од регулисаних региона гена, јер се чини да је генотип ризика повезан са измењеним нивоима експресије мРНА. Вјерујемо да наш налаз захтијева потврдну истрагу у другим популацијама, а основни молекуларни механизам је разјашњен ин витро .

Сукоб интереса

Аутори наводе да нема сукоба интереса.

Приступања

ГенБанк / ЕМБЛ / ДДБЈ

  • НТ_007592

Додатне информације

Ворд документи

  1. 1.

    Допунска табела

    Додатне информације прате рад на веб локацији Молекуларна психијатрија (//ввв.натуре.цом/мп)