Учешће рецептора естрогена β у одржавању серотонергичних неурона дорзалног рапхе | молекуларна психијатрија

Учешће рецептора естрогена β у одржавању серотонергичних неурона дорзалног рапхе | молекуларна психијатрија

Anonim

Субјекти

  • Депресија
  • Механизам дејства
  • Молекуларна неурознаност

Апстрактан

Серотонергични неурони језгра дорзалног рапхе (ДР) у ЦНС-у су укључени у страх, анксиозност и депресију. Депресија и анксиозност се јављају прилично често код жена у постменопаузи, али замена естрогена за исправљање ових поремећаја у ЦНС-у тренутно није фаворизована јер естроген са собом носи повећан ризик од рака дојке. Синтеза, ослобађање и поновни унос серотонина у ДР су мета фармацеутских лекова у лечењу депресије. У овом истраживању смо испитивали имунохистохемију, експресију два нуклеарна рецептора, односно естрогенске рецепторе ЕРα и ЕРβ. Открили смо да се ЕРβ, али не ЕРα, изразито изражава у ДР и да нема старосне разлике и промене са старењем броја неурона који су позитивни на триптофан хидроксилазу (ТПХ) у ДР мишева дивљег типа (ВТ). Међутим, код овариектомизованих (ОВКС) ВТ и код ЕРβ - / - мишева, примећено је значајно смањење броја ТПХ-позитивних неурона нормалног изгледа и значајно повећање ТПХ-позитивних ћелија у облику вретена. Ове неуронске промене спречене су код мишева 1–3 недеље (али не 10 недеља) након ОВКС од стране селективног ЕРβ агониста, ЛИ3201, дате у облику пелета са континуалним ослобађањем током 3 дана. ЕРβ агонист није имао ефекта на хомеостазу глукозе. Дакле, почетак деловања агониста ЕРβ је брз, али постоји временски ограничен период након губитка естрогена када је лек користан. Закључујемо да би, уместо да естрадиол, агонисти ЕРβ могли бити корисни лекови за одржавање функционалних ДР неурона за лечење постменопаузалне депресије.

Увод

Естрогени рецептори (ЕР) β су широко експримирани у мишјем мозгу у развоју и од суштинског су значаја за правилно наношење кортекса. 1, 2, 3 Помоћу имунохистохемијских техника, експресија ЕРβ проучавана је у неколико лабораторија. 4 Експресија ЕРβ код хипофизе одраслих 5, 6 или у ендометријуму је мало или 5, док је у млечној жлезди ЕРβ обилна и има антипролиферативне, продиференцијалне ефекте. За разлику од развоја мишјег мозга где ЕРβ има у изобиљу, код одраслих је експресија ЕРβ ограничена на неколико подручја мозга. Због недостатка експресије ЕРβ у хипофизи, селективни ЕРβ агонисти не прекидају хипоталамо-хипофиза-гонадалне оси, нити узрокују раст млечне жлезде или матернице. 5, 8

Већ неко време је познато да се ЕРα не изражава у серотонергичким неуронима дорзалног рапхе (ДР), али да естроген утиче на серотонергички систем. 9 Дуги низ година се сматрало да су ефекти естрогена на ДР индиректни. Ово гледиште је требало ревидирати након открића ЕРβ 1996. и проналаска у више лабораторија експресије ЕРβ у неуронима ДР. 10, 11 Е2 је подједнако моћан на ЕРα и ЕРβ, али синтетизовани су агонисти селективни за ЕРα или ЕРβ. Добили смо једног ЕРβ-селективног агониста од фармацеутске компаније Ели Лилли (ЛИ3201) и показали да је анксиолитик. 12

У овом истраживању смо испитали експресију ЕРβ у ДР (дивљи тип) ВТ мишева и последице губитка ЕРβ на ДР неуроне. Поред тога, истраживали смо ефекте ЛИ3201 на триптофан хидроксилазу (ТПХ) у ДР и, као што смо раније објавили да је један ЕРβ-селективни лиганд, 2, 3- бис (4-хидроксифенил) -пропионитрил (ДПН), дијабетогени, 13 испитали смо ефекте ЛИ3201 на хомеостазу глукозе.

материјали и методе

Животиње

ВТ, ЕРβ - / - и ЕРа - / - мишеви су генерисани као што је претходно описано. 14, 15, 16 Сви мишеви су враћени у Ц57БЛ6 позадину најмање 10 генерација. Животиње су смештене у 12-сатном циклусу светла / тамне под контролисаном температуром (20–22 ° Ц) и храњене су стандардном прехраном за пелете водом која је била ад адбитна . За прикупљање мозга, мишеви су дубоко анестезирани угљен-диоксидом и перфузирани ручно, користећи гравитацију кроз леву комору са физиолошком отопином фосфатном пуфером и 4% параформалдехидом. Мозак је сециран и постфиксан у истом фиксативу преко ноћи на 4 ° Ц и обрађен за 5 µм парафинске секције. Да би се испитала хомеостаза глукозе, скелетни мишићи и бело масно ткиво су изрезани, одмах замрзнути за квантитативни ПЦР у реалном времену и крв је узета из орбиталног синуса за мерење серумских метаболичких панела.

Овариектомија и третман Е2 или ЛИ3201

У узрасту од 6 месеци, 45 ВТ мишева је овариектомизовано (ОВКС) обострано преко једног дорзалног средњег реза кроз лумбалну регију, чинећи оба јајника доступним. Јајашца везана за масно јастуче њежно је стегнута да се јајник подигне и екстериоризира. Након тога, периоваријска врећа је огуљена на површини јајника, омогућавајући уклањање целог јајника. Ова операција је обављена у лабораторији Јацксон (Сацраменто, ЦА, САД).

1, 3 и 10 недеља након ОВКС, мишеви су насумично смештени у три групе како следи: (1) пет мишева је убачено са плацебо пелетима; (2) пет мишева је убачено са Е2 пелетима (10 µг кг -1 на дан, 6, 3 µг по пелету за 21-дневно ослобађање), Инновативе Ресеарцх оф Америца, Сарасота, ФЛ, САД); и (3) пет мишева је убачено са ЛИ3201 пелетима (200 µг кг -1 на дан, Ели Лилли, Индианаполис, ИН, САД) супкутано. Хормонско лечење је трајало 3 дана.

Имунохистохемија и број ћелија

Одјељци уграђени у парафин су одмашћени у ксилену, након чега је услиједила рехидрација у ступњеваним концентрацијама етанола. Добивање антигена постигнуто је постављањем слајдова у цитратни пуфер на 97 ° Ц (пХ 6, 0), током 10 минута. Ендогена пероксидаза је угашена 30 мин инкубацијом у 1% Х202 у 50% метанолу након чега је блокирано 10% неспецифичног везивања протеина са 3% говеђег серумског албумина. Одсеци су инкубирани са зечјим анти-ЕРα (1: 500, Санта Цруз Биотецхнологи, Санта Цруз, ЦА, САД), пилећим анти-ЕРβ (1: 200 домаће израде) или мишјим анти-ТПХ (1: 800, Сигма-Алдрицх, Ст. Лоуис, МО, САД) у 3% говеђег серумског албумина са физиолошком отопином фосфатом и 0, 1% НП40 на собној температури преко ноћи. Одговарајући раствор ХРП полимера (Био царе медицал, Цонцорд, Калифорнија, САД) је додан у трајању од 30 минута на собној температури за бојење ЕРα и ТПХ. Секције су инкубиране током 1 сата са биотинилираним секундарним антителима при разблажењу 1: 200 и инкубиране 1 х авидин-биотинилираним комплексом пероксидазе хрена (Векторске лабораторије, Бурлингаме, Калифорнија, САД) током 1 сата за ЕРП бојење. Слајдови су развијени коришћењем ДАБ (Дако, Царпинтериа, ЦА, САД) и контрастирани са хематоксилином. Да би се бројао број ТПХ-позитивних ћелија, шест серијских одсека који укључују ДР одабрани су од сваког миша, а ТПХ ћелије су пребројане у целом ДР и бочном делу ДР од стране два независна истраживача. Локација ДР и бочни део ДР су одређени као што је раније описано. 17

Ефекти ЛИ3201 на хомеостазу глукозе

Како би се посматрали ефекти ЛИ3201 на метаболизам глукозе, ВТ мужјацима су примењени ЛИ3201 оралном одмерком (0, 35 мг кг -1 на дан) током 3 дана. Било је 27 мишева у групи која је била третирана носачем и 27 у групи која је била третирана ЛИ3201. Мишеви су затим подељени у три групе како следи: (1) девет мишева третираних носачем и девет са ЛИ3201 подвргнуто је тесту толеранције на глукозу; (2) девет мишева третираних носачем и девет са ЛИ3201 подвргнуто је тесту толеранције на инсулин; и (3) девет мишева третираних носачем и девет са ЛИ3201 коришћено је за прикупљање крви и ткива.

ПЦР у реалном времену реверзне транскрипције

Укупна РНА је екстрахована из смрзнутог скелетног мишића и белог масног ткива коришћењем РНеаси Мини КИТ (Киаген, Валенциа, ЦА, САД), а затим синтезом цДНА коришћењем реверзне транскриптазе СуперСцрипт ИИИ (Инвитроген, Гранд Исланд, НИ, УСА). Сви гени су анализирани са СИБР методом детекције зелене боје коришћењем апликације Апплиед Биосистемс 7500 у реалном времену ПЦР (Фостер Цити, ЦА, САД) и сваки ПЦР је обложен у дупликату. 36Б4 је коришћен као интерна контрола за свако ПЦР појачало. Следеће секвенце прајмера су коришћене: за супстрат рецептора за инсулин-1 (ИРС-1), 5′-ТЦТАЦАЦЦЦГАГАЦГААЦАЦТ-3 ′ и 5′-ТГГГЦЦТТТГЦЦЦГАТТАТГ-3 ′; за фосфоинозид-3-киназу (ПИ3К), 5′-ЦГАГАГТГТЦГТЦАЦАГТГТЦ-3 'и 5′-ТГТТЦГЦТТЦЦАЦАААЦАЦАГ-3'; за 36Б4, 5′-ГЦТГАТГГГЦААГААЦАЦ-3 ′ и 5′-АТГТГАГГЦАГЦАГТТТЦТЦ-3 ′; за транспортер глукозе 4 (ГЛУТ4), 5′-ЦЦГЦГГЦЦТЦЦТАТГАГАТАЦТ-3 ′ и 5′-АГГЦАЦЦЦЦГААГАТГАГТ-3 ′.

Резултати

Изражавање ЕР-а у ДР код одраслих мушких мишева

У узрасту од 6 месеци, средњи мозгови пет ВТ мушких мишева имуностанирани су антителима против ЕРа и ЕРβ. Пронађено је неколико ЕРα-позитивних неурона у периакуедуцтал сиви, али ниједан није откривен у ДР. ЕРП-позитивни неурони су били обилни у ДР (Слика 1). Сва мрља је била нуклеарна. Ови подаци имплицирају да ЕРβ, али не ЕРα, може директно утицати на ДР, који је примарни центар пројекција серотонина, с познатим функцијама модулације лимбичког система, а тиме и поремећаја расположења.

Image

Експресија естрогених рецептора (ЕР) у језгру дорзалног рапхе (ДР) 6-месечних мушких мишева. Неколико ЕРα-позитивних ћелија пронађено је у периакуедуктал сивој боји (ПАГ), али не и у ДР ( а ). Многи ЕРβ-позитивни неурони се налазе у ДР ( б ). Испрекидана линија показује границу ДР. Кутије представљају веће увећање имунореактивног ЕРα у ПАГ-у и ЕРβ у бочном делу ДР. Линије скале је 100 µм при мањем увећању и 20 µм при већем увећању.

Слика пуне величине

  • Преузмите ПоверПоинт слајд

Утицај пола и старости на експресију ТПХ у ДР

Да бисмо посматрали утицај старости и пола на серотонергичке неуроне, испитали смо експресију ТПХ-а, који је ензим који ограничава брзину у синтези серотонина (5-ХТ) у мозгу. Мозак 3- и 15-месечних ВТ мишева имуностаниран је моноклонским антителом подигнутим против ТПХ; н = 5). Као што се очекивало, ТПХ је обилно експримиран у неуронима ДР. Није било разлике у полу и промене са старењем у броју ТПХ-позитивних неурона (слика 2). Одбројали смо број ТПХ-позитивних ћелија у целом ДР и бочном делу ДР одвојено, јер је раније објављено да је бочни, али не и вентромедијални ДР подрегијски ДР осетљив на стрес. 18

Image

Поређење експресије триптофан хидроксилазе (ТПХ) у ДР код мушкараца / жена ( а, б / ц, д ), младих / стараца ( а, б / ц, д ) и (дивљи тип) ВТ / гена са недостатком гена ( а - д / е ) мишеви ( н = 5). Не постоји ни спол ни старосна разлика у броју ТПХ-позитивних неурона. Међутим, постоји значајно смањење ТПХ у мушким мишевима са рецепторима естрогена (ЕР) β - / - . У међувремену, примећен је пораст ћелија у облику вретенастих позитивних на ТПХ на бочном делу ДР мушких мишева старијих од ЕР. ** П <0, 01 према ВТ мужјаку, старости 15 месеци (М). Линија скале је 100 µм при мањем увећању и 20 µм при већем увећању.

Слика пуне величине

  • Преузмите ПоверПоинт слајд

Утицај инактивације ЕРβ на ТПХ у ДР

Примећено је значајно смањење експресије ТПХ код мишева ЕРβ - / - (Слика 2). Поред тога, многи ТПХ-позитивни неурони у бочном делу ДР-а имали су вретенаст облик. Ниједне ћелије у облику вретена нису откривене у ДР код старих ВТ мишева. Подаци указују да је промена у морфологији неурона латералног дела ДР резултат губитка ЕРβ.

Ефекти ОВКС и лечење са Е2 или ЕРβ-селективним агонистом на експресију ТПХ у ДР

Иако је познато да Е2 утиче на серотонергичке активности, место деловања Е2 је било нејасно, јер у ДР-у нема експресије ЕРα. Испитали смо утицај аблације естрогена на серотонергичке неуроне и ефекте додавања Е2 или ЕРβ-селективног агониста (ЛИ3201) на овај систем. У узрасту од 6 месеци, ВТ женке мишева су овариектомизоване (ОВКС). У 1, 3 и 10 недеља након ОВКС, ови мишеви су имплантирани субкутано плацебо, Е2 или ЛИ3201 пелетима ( н = 5). Три дана након имплантације имунохистохемијом је прегледан средњи мозак. У поређењу са нетакнутим 6-месечним ВТ женским мишевима, дошло је до значајног смањења броја ТПХ-позитивних неурона у бочном делу ДР 3 и 10 недеља после ОВКС (слика 3). У групама за лечење ЛИ3201 и Е2, када је лечење започето 1 и 3 недеље након ОВКС, број ТПХ-позитивних неурона био је већи него у плацебо-лечених ОВКС мишева. Међутим, 10 недеља након ускраћивања естрогена, тродневни третман ЛИ3201 више није могао да обнови ТПХ-позитивне неуроне (Слика 3). Ове промене су такође биле очигледне нарочито у бочном делу ДР.

Image

У узрасту од 6 месеци, женке мишева дивљег типа (ВТ) биле су овариектомизоване (ОВКС). У 1, 3 и 10 недеља (В) након ОВКС, мишеви су имплантирани супкутано плацебом, Е2 или ЛИ3201 пелетима. Трајање изложености хормонима било је 3 дана. У свакој групи било је пет мишева. Фотомикрографије представљају промену позитивности триптофан хидроксилазе (ТПХ) у дорзалном рапхеу (ДР), а графикон представља ТПХ-позитивне бројеве ћелија у целом или бочном делу ДР. Број ТПХ-позитивних ћелија био је значајно нижи код мишева 3 и 10 недеља после ОВКС него код нетакнутих ВТ женских мишева ( а, д, г ). Третман ЛИ3201 значајно је обновио ТПХ-позитивне ћелије у групама 1 недељу и 3 недеље након ОВКС ( ц, ф ). Естрадиол пелете нису у потпуности обновиле експресију ТПХ код мишева 3 недеље након ОВКС ( е ), иако је обнављао експресију ТПХ у року од 1 недеље ( б ). Третман ЛИ3201 10 недеља након ОВКС није обновио ТПХ-позитивне ћелије, нити третман Е2 ( х, и ). Подаци су приказани као средства ± сем * П <0, 05 у односу на нелијечене жене, П <0, 05 у односу на мишеве третиране плацебом у групи. Линија скале представља 100 µм.

Слика пуне величине

  • Преузмите ПоверПоинт слајд

Ефекти ОВКС и лечење са Е2 или ЕРβ-селективним агонистом на експресију ЕРβ у ДР

Анализирали смо промену ЕРβ експресије у ДР. Једну недељу после ОВКС, ЕРβ-позитивни неурони су и даље обилни у ДР. Додатак Е2 и ЛИ3201 повећао је експресију ЕРβ у ДР, али је интензивнији ефекат примећен код мишева третираних ЛИ3201 (Слика 4). Експресија ЕРβ постепено се смањивала код мишева који су третирани плацебо пелетима 3 недеље након ОВКС, али имунореактивност ЕРβ одржавана је третманом Е2 или ЛИ3201. Десет недеља након ОВКС дошло је до значајног смањења броја ЕРβ-позитивних неурона, а лечење Е2 и ЛИ3201 резултирало је само малим порастом обојења ЕРβ (слика 4).

Image

Фотомикрографије представљају β-позитивне ћелије естрогенског рецептора (ЕР) у дорзалном рапхеу (ДР) након ОВКС и третман плацебом, Е2 или ЛИ3201 током 3 дана ( н = 5). ЕРβ-позитивне ћелије постепено су се смањивале након овариектомије (ОВКС) у групи коју су лечиле плацебо ( а, д, г ). У групи коју су лечили Е2 дошло је до мањег обнављања ЕРβ-позитивних ћелија ( б, е ). Третман ЛИ3201 снажно је вратио експресију ЕРβ у групама у којима је лечење почело 1 и 3 недеље ( ц, ф ) после ОВКС, али није имало ефекта у групи у којој је замена почела 10 недеља после ОВКС ( и ). Линије скале је 100 µм при мањем увећању и 20 µм при већем увећању.

Слика пуне величине

  • Преузмите ПоверПоинт слајд

Тестови за толеранцију на глукозу и инсулин на мишевима који су третирани ЕРβ-селективним агонистом

Као што смо раније известили да је други ЕРβ агонист, ДПН, дијабетоген, прегледали смо хомеостазу глукозе код мишева који су третирани ЛИ3201. Пре тестирања, мишеви су страдали током 12 х, а затим су примили 1, 0 У кг -1 нормалног инсулина (Хумулин Р, Ели Лилли) или 1 г кг -1 телесне масе 100 мг мл -1 раствор глукозе у стерилној води интраперитонеална ињекција.

Нису примећене значајне разлике у тесту толеранције на глукозу: Тридесет минута након давања болуса глукозе интраперитонеално је додато на мишеве који су третирани вехиклом и ЛИ3201, вршне вредности глукозе и површину под кривуљом концентрације у плазми / времену (подручја испод криве, АУЦ) код мишева третираних ЛИ3201 био је нешто нижи него код мишева третираних носачем (слике 5а и ц).

Image

Поређење тестова толеранције на глукозу (ГТТ; н = 9) и тестова толеранције на инсулин (ИТТ; н = 9) и њихових припадајућих подручја испод кривуље (АУЦ) код (дивљих) ВТ мишева третираних са возилом (возилом) или ЛИ3201 за 3 дана. ( а ) ГТТ у ВТ мишевима који су третирани са Вех или ЛИ3201. Нису примећене значајне разлике у ГТТ-у. ( б ) ИТТ код ВТ мишева третираних са Вех или ЛИ3201. У време 0, 5 и 120 мин након болусне ињекције инсулина, ниво глукозе у мишевима третираним ЛИ3201 био је виши него у мишевима третираним возилима. ( ц) Мерење АУЦ ГТТ-а код ВТ мишева третираних са Вех или ЛИ3201. ( д) Мерење АУЦ ИТТ-а код ВТ мишева третираних са Вех или ЛИ3201. ( е) Нивои мРНА регулисане инсулином у скелетном мишићу (СМ) и белом масном ткиву (ВАТ) ВТ мишева третираних са Вех или ЛИ3201 ( н = 9). Третман са ЛИ3201 током 3 дана смањио је ниво мРНА транспортера глукозе 4 (ГЛУТ4) у СМ. У ВАТ-у, третман са ЛИ3201 током 3 дана повећао је ниво ГЛУТ4, супстрата за рецептор инсулина-1 (ИРС-1) и мРНА фосфоинозид-3-киназе (ПИ3К). Подаци су представљени као средња вредност ± сем * П <0, 05 насупрот мишевима третираним возилима.

Слика пуне величине

  • Преузмите ПоверПоинт слајд

Након брзог преко ноћи, мишеви третирани ЛИ3201 имали су мали, али значајно већи ниво глукозе у односу на мишеве третиране носачем (110 наспрам 90 мг дл- 1 глукозе). Пет и 120 минута након давања болусног инзулина интраперитонеално мишевима третираним носачем и ЛИ3201, вршни нивои глукозе у мишевима третираним ЛИ3201 били су виши него у мишевима третираним носачем, и дошло је до малог пораста АУЦ (Слике 5б и д).

Каскада сигнала инзулина у скелетним мишићима и белом масном ткиву

У поређењу са мишевима третираним носачем, третман са ЛИ3201 током 3 дана изазвао је мало смањење експресије ГЛУТ4 и није имао ефекта на нивое мРНА ИРС-1 или ПИ3К у скелетном мишићу. Међутим, у белом масном ткиву, третман ЛИ3201 изазвао је двоструко повећање нивоа ГЛУТ4, ИРС-1 и ПИ3К мРНА (слика 5е).

Дискусија

Пре је истакнуто да естроген може утицати на серотонински систем и последично изменити ментални статус. 19 Претходне студије су показале да је ЕРβ мРНА пронађена у ДР. 11, 20 Експресија ЕРβ мРНА у ДР смањује се након ОВКС и заменом Е2 може се профил експресије гена вратити у нормалу. 21 Наше имунохистохемијско истраживање показује присуство ЕРβ у ДР, који је примарни центар мозга серотонинских пројекција. Експресија ЕРβ, а не ЕРα, у ДР је довољна да предвиђа улогу овог рецептора у серотонергичким системима и у модулацији лимбичког система и поремећаја расположења.

Број ТПХ-позитивних ћелија у ДР није се мењао са годинама или родом код ВТ мишева. Међутим, како је са старом ЕР / / било изражено смањење броја ТПХ-позитивних неурона нормалног изгледа и пораст ТПХ-позитивних ћелија у облику вретена у бочном ДР. Раније је објављено да је бочни део ДР подрегија ДР 18 осетљива на стрес и такође је осетљива на Е 2 . 19 Поред тога, ЕРβ, али не ЕРα, експримиран је у ДР одраслих мишева. С обзиром на то, могуће је закључити да ће губитак функције ЕРβ довести до промене расположења код одраслих и бочни део ДР може имати важну улогу у овим променама.

Један од проблема лечења депресије селективним инхибиторима поновне похране серотонина (ССРИ) је одлагање почетка деловања ових лекова које може бити чак 6 недеља. 22 Начин деловања ССРИ је повишена синаптичка концентрација серотонина (5-ХТ). У раном третману с ССРИ, повишена концентрација 5-ХТ резултира смањењем повратног отпуштања серотонина. Касније, како се лечење ССРИ наставља, серотонергички систем се поново прилагођава и синаптичка концентрација серотонина постаје повишена. Ране негативне повратне информације посредују путем терминалних 5-ХТ и сомато-дендритских 5-ХТ рецептора и сматра се да су одговорне за споро започињање терапеутског ефекта ССРИ. У овој студији открили смо да лечење ЛИ3201 има брзи почетак ефекта на серотонергичку активност с повећаном експресијом ТПХ-а и ЕРβ за 3 дана лечења ЛИ3201. Стога, ЛИ3201 може бити од клиничке користи у скраћењу времена почетка корисних ефеката ССРИ. Међутим, ЛИ3201 је обновио експресију ТПХ само у ДР када је трајање редукције естрогена било <10 недеља. Претходна истраживања показала су да код жена постоји могућност након губитка функције јајника током које је хормонска надомјесна терапија ефикасна код жена у постменопаузи. 23 Такође је показано да је понашање мишева након ОВКС враћено третманом са Е2 или ДПН, 24, 25, али промене у понашању и ефикасности замене Е2 као функције времена после ОВКС нису проучаване. . Овакве студије су потребне за разумевање механизма поремећаја расположења у постменопаузи и укључивање ЕРβ.

Претходно смо известили да употреба ДПН током 3 дана смањује ГЛУТ4 експресију у скелетном мишићу 13 и да блок ЕРβ тамоксифеном у мишићима ЕРα - / - повећава експресију ГЛУТ4 протеина и побољшава хомеостазу глукозе. 26 Ови резултати повећали су могућност да активност ЕРβ може имати дијабетогене ефекте. Такође смо пријавили да код ЕРβ - / - мишева долази до кашњења у првој фази ослобађања инсулина после интраперитонеалног болуса глукозе. 26 У овој студији приметили смо врло благе промене хомеостазе глукозе током лечења ЛИ3201 током 3 дана. Уместо тога, тест толеранције на глукозу показао је дискретно побољшање толеранције на глукозу, са смањеном АУЦ. Иако је тест толеранције на инзулин показао одређено смањење инзулинске осетљивости, након лечења ЛИ3201, промене су биле у границама нормале.

У скелетном мишићу нису примећене промене у ИРС-1 или ПИ3К, али је дошло до малог смањења експресије ГЛУТ4. Међутим, у масном ткиву смо приметили значајно повећање ГЛУТ4, ИРС-1 и ПИ3К мРНА. Скелетни мишић је одговоран за најмање 75% уноса глукозе изазваног инсулином, а 27, а недавна истраживања на пацијентима са дијабетесом показују да смањење ГЛУТ4 експресије у скелетним мишићима за само 9% корелира са дијабетесом типа 2. 28, 29, 30 У нашој студији, међутим, смањење експресије гена ГЛУТ4 није било довољно за индукцију инзулинске резистенције.

Закључујемо да тродневни третман ЛИ3201 изазива само благе промене хомеостазе глукозе, али ефикасно обнављање ТПХ експресије у ДР. Предвиђамо да, уместо естрадиола, ЕРβ агонисти могу бити корисни лекови за одржавање функционалних неурона у ДР за лечење постменопаузалне депресије.