Протоколи (Април 2020)

Употреба повишеног плус лавиринта као тест понашања код глодара повезаних са анксиозношћу

Употреба повишеног плус лавиринта као тест понашања код глодара повезаних са анксиозношћу

Апстрактан Повишен плус лавиринт је широко кориштен тест понашања за глодаре и он је валидиран за процену анти-анксиозних ефеката фармаколошких лекова и стероидних хормона и за дефинисање региона и механизама мозга који су у основи понашања везаног уз анксиозност. Укратко, пацови или мишеви су смештени на месту спајања четири крака лавиринта, окренутој према отвореној руци, а уносе / трајање у свакој руци бележи систем за праћење видео записа и истовремено посматрач током 5 минута.

Стварање дефинисане и уједначене популације ЦНС прогенера и неурона из матичних ћелија ембрионалних матичних ћелија

Стварање дефинисане и уједначене популације ЦНС прогенера и неурона из матичних ћелија ембрионалних матичних ћелија

Апстрактан Описан је детаљан протокол који омогућава генерисање у основи чистих популација глутаматергичних неурона из ћелија мишјих ембрионалних матичних (ЕС) станица. Заснива се на култури ћелија ЕС које се понављајућим цепањем одржавају недиференцираним и накнадно се амплификују као неприпадни ћелијски агрег

Исправљање: Стандардизовани протокол за поновљени социјални стресни стрес код мишева

Исправљање: Стандардизовани протокол за поновљени социјални стресни стрес код мишева

Оригинални чланак објављен је 21. јула 2011 Нат. Протоц. 6 , 1183–1191 (2011); дои: 10.1038 / нпрот.2011.361; објављено на мрежи 21. јула 2011; исправљено након штампања 17. децембра 2014 У верзији овог чланка, која је првобитно објављена, дошло је до неке забуне у тумачењу реченице „Даље, порази би требало да се врше под сталном ветеринарском проценом и уз потпуно одобрење свих потребних институционалних одбора за преглед и стандарда.“ За додатну јасноћу, реченица је промењено тако да гласи „Даље, порази би требало да се врше уз потпуно одобрење свих потребних институционалних одбора за ревизи

Анализа цитокинезе-блок микроцрквених цитокуса

Анализа цитокинезе-блок микроцрквених цитокуса

Овај чланак је ажуриран Апстрактан Анализа цитокинезе која блокира цитокинезу микротуклеусом је свеобухватни систем за мерење оштећења ДНК, цитостазе и цитотоксичности. Догађаји оштећења ДНК се бодују посебно у једном подељеним бинукленираним (БН) ћелијама и укључују (а) микронуклеусе (МНи), биомаркер пуцања хро

Укључивање флуоротирозина за специфичну локацију у Р2 подјединицу Е. цоли рибонуклеотид редуктазе експримираном везом протеина

Укључивање флуоротирозина за специфичну локацију у Р2 подјединицу Е. цоли рибонуклеотид редуктазе експримираном везом протеина

Апстрактан Изражено везивање протеина (ЕПЛ) омогућава семисинтезу циљног протеина са уграђеним собама или неприродним аминокиселинама на њиховим Н или Ц терминима. Овде смо описали протокол који је развила наша лабораторија за уградњу флуоротирозина (Ф н Ис) у остатку 356 мале подјединице Есцхерицхиа

Исправљање: Анализа броја копија у целини генома

Исправљање: Анализа броја копија у целини генома

Оригинални чланак објављен је 03. маја 2012. године Нат. Протоц. 7 , 1024–1041 (2012); објављено на мрежи 3. маја 2012; исправљено након штампања 24. фебруара 2016 У првобитно објављеној верзији овог чланка, јединице за концентрацију НаЦл у НСТ пуферу описане у одељку Подешавање реагенса нису биле тачне. Исправна јединица треба да буде мМ. Грешка је исправљена у ХТМЛ и ПДФ верзији чланка. Аутори Потражите Тимоур Баслан у: Часописи за истраживање природе • ПубМед • Гоогле зналца Потражите Јуде Кендалл у: Часописи за

Тест ин виво микронуклеуса високе пропусности за скрининг за нестабилност генома код мишева

Тест ин виво микронуклеуса високе пропусности за скрининг за нестабилност генома код мишева

Субјекти Оштећења и поправка ДНК Проточна цитометрија Геномска нестабилност Миш Апстрактан Описали смо осетљиву, робусну, високопропусну методу за квантификацију стварања микронуклеуса, маркера нестабилности генома, у мишјим еритроцитима. Микронуклеи су цели хромозоми или сегменти хромосома који су одвојени од језгра. Остале методе откривања ослањају се на радно интензивне технике засноване на микроскопији. Овде смо описали дводневну проточ

Преглед активности супстрата (САС): општа процедура за припрему и скрининг библиотеке супстрата на бази фрагмента на бази непептидне протеазе за откривање инхибитора

Преглед активности супстрата (САС): општа процедура за припрему и скрининг библиотеке супстрата на бази фрагмента на бази непептидне протеазе за откривање инхибитора

Апстрактан Скривање активности супстрата (САС) је фрагментирана метода за брзи развој нових супстрата и њихову претворбу у непептидне инхибиторе Цис и Сер протеаза. Метода се састоји од три корака: (и) прикаже се библиотека Н- ацил аминокамарина са различитим Н- ацилним групама мале молекуларне тежине

Примарна култура говеђих хромафинских ћелија

Примарна култура говеђих хромафинских ћелија

Апстрактан Овај протокол описује примарну културу појединих ћелија хромафина добијених ензимским варењем из надбубрежне медуле говеђе надбубрежне жлезде. Од касних 1970-их, такве ћелије су биле корисни систем модела за проучавање биосинтезе, складиштења и ослобађања неуротрансмитера у катехоламинергичком систему. Протокол се може поделити у три фазе: изолација ћелија (4-6 х), одређивање одрживих бројева ћелија (приближно 30 мин) и раст у култури (3–7 д). Алтернативни поступак је извођење студија у станичној линији хромафин (феокромоцитом), као што је ПЦ12, иако су такве тран

Анализе засноване на биосензору за ПКС, ХХК и сродне 2-алкил-4-кинолон кворне сензорне молекуле

Анализе засноване на биосензору за ПКС, ХХК и сродне 2-алкил-4-кинолон кворне сензорне молекуле

Апстрактан 2-алкил-4-кинолони (АХК), попут 2-хептил-3-хидрокси-4-хинолона (ПКС) и 2-хептил-4-кинолона (ХХК) су сигнални молекули кворума. Овде смо описали методе за детекцију АХК, противном идентификацијом и квантификацијом, који употребљавају АХК сој биосензора типа Псеудомонас аеругиноса . Протокол описује и танкослојну кроматографију (ТЛЦ) и микротитер плочу, који користе биолуминесценцију или зелену боју пиоцијанина као крајње тачке детекције. Екстракти органских растварача из бактеријских ћелија или супернатанти

Квантитативна анализа испитивања хватања конформације хромозома (3Ц-кПЦР)

Квантитативна анализа испитивања хватања конформације хромозома (3Ц-кПЦР)

Апстрактан Технологија хватања хромосомске конформације (3Ц) је пионирска методологија која омогућава истраживање ин виво геномске организације у скали која обухвата неколико десетина до пар стотина килобазора. Разумевање савијања генома у овој скали је посебно важно код сисара где су распршени регулаторни елементи, попут појачивача или изолатора, укључени у регулацију гена. 3Ц технологи

Стварање екстраката без ћелија Ксенопусових јаја и демембранираног хроматина сперме за састављање и изолацију ин витро формираних језгара за Вестерн блот и скенирајућу електронску микроскопију (СЕМ)

Стварање екстраката без ћелија Ксенопусових јаја и демембранираног хроматина сперме за састављање и изолацију ин витро формираних језгара за Вестерн блот и скенирајућу електронску микроскопију (СЕМ)

Апстрактан Овај протокол детаљно описује методе за генерисање екстракта без ћелија и ДНК шаблона из јајашца и хроматина сперме, кречњака Ксенопус лаевис . Овај систем смо користили скенирајућом електронском микроскопијом (СЕМ), као што је овде детаљније, за анализу биохемијских потреба и структуралних путева за биогенезу еукариотских нуклеарних овојница (НЕс) и комплекса нуклеарних пора (НПЦ). Овај протокол захтева приступ женским жабама које су приморане да полажу јаја и мушкој жаби која се убија ради припреме хроматина сперме. Екстракти јаја треба припремити у 1 д и могу се чувати више месеци

Добијање генома из некултивисаних микроорганизама из животне средине коришћењем једноћелијске геномике засноване на ФАЦС

Добијање генома из некултивисаних микроорганизама из животне средине коришћењем једноћелијске геномике засноване на ФАЦС

Субјекти Микробиологија животне средине Проточна цитометрија Геномицс Повећање целокупног генома Апстрактан Једноћелијска геномика је моћно средство за истраживање генетског састава микроорганизама из околине, чија је велика већина тешко, ако не и немогуће, култивисати тренутним приступима. Овде представљамо свеобухватан протокол за добијање генома из некултивисаних микроба из животне средине путем изоловане једноцелијске изолације са високом пропусношћу ФАЦС. Протокол обухвата очување и претходну обраду различитих узорака из окружења, н

Артритис изазван колагеном

Артритис изазван колагеном

Апстрактан Модел миша изазван колагеном (ЦИА) модел миша најчешће је проучаван аутоимуни модел реуматоидног артритиса. Аутоимуни артритис се индукује у овом моделу имунизацијом емулзијом комплетног Фреундова адјуванса и колагена типа ИИ (ЦИИ). Овај протокол описује кораке неопходне за добијање, лечење и припрему ЦИИ, као и избор сојева миша, правилну технику имунизације и процену учесталости и тежине артритиса. Обично се први знакови артритиса

Генерација церебралних органоида из плурипотентних матичних ћелија

Генерација церебралних органоида из плурипотентних матичних ћелија

Субјекти Развој нервног система Неурогенеза Неуролошки модели Диференција матичних ћелија Апстрактан Развој људског мозга показује неколико јединствених аспеката, попут повећане сложености и ширења неуронског оутпута, који су се показали тешким за проучавање у моделним организмима. Као резултат, ин витро приступи моделирању људског мозга и болести су интензивно подручје истраживања. Овде смо описали недавно успостављени протокол за генерисање 3Д ткива мозга, такозване церебралне органоиде, који блиско опонашају ендогени

Ерратум: Анализа уплетених честица супер намотане кружне ДНК помоћу пептидних нуклеинских киселина

Ерратум: Анализа уплетених честица супер намотане кружне ДНК помоћу пептидних нуклеинских киселина

Оригинални чланак објављен је 21. августа 2014. године Нат. Протоц. 9 , 2206–2223 (2014); дои: 10.1038 / нпрот.2014.152; објављено на мрежи 21. августа 2014; исправљено након штампања 12. септембра 2014 У верзији овог чланка, првобитно објављеном, извор из кога су прилагођене слике 2, 4, 8 и 9 није наведен и исправно наведен. Грешка је исправљена у ХТМЛ и ПДФ верзији чланка. Аутори Потражите Камилла Норрегаард у: Часописи за истраживање природе • ПубМед • Гоогле зналца Потражите Магнуса Андерссона у: Часописи за истраживање при

Свеобухватна анализа мононуклеарних фагоцита мрежнице мрежнице

Свеобухватна анализа мононуклеарних фагоцита мрежнице мрежнице

Субјекти Неуроиммунологи Ретина Апстрактан Урођени имуни систем се активира у великом броју дегенеративних и инфламаторних поремећаја мрежнице, попут дегенерације макуле повезане са старењем (АМД). Микроглија мрежнице, хороидни макрофаги и регрутовани моноцити, колективно названи ретинални мононуклеарни фагоцити, су критичне одреднице исхода очне болести. Многе пу

Развој, валидација и примена афинитета имобилисаног метала за високопропусне тестове за фосфохемикалије (ИМАП) за библиотеке једињења са ниском молекуларном тежином

Развој, валидација и примена афинитета имобилисаног метала за високопропусне тестове за фосфохемикалије (ИМАП) за библиотеке једињења са ниском молекуларном тежином

Апстрактан Овај протокол описује развој анализе, валидацију и примену аутоматизованог афинитета имобилизованог метала за фосфохемикалије (ИМАП) флуоресцентне поларизације (ФП) и временски резолуцију испитивања флуоресцентне резонанције високог протока (ХТС) за идентификацију инхибитори киназе ниске молекуларне тежине. Оба поступка се изводе у минијатуризованим количинама киназне реакције и укључују поступно додавање тест или контролних једињења, ензима и супстрата / АТП. Реакције киназе заустављају се додатним додавањем пуфера који везује ИМАП. Описани су атрибути испитивања ИМАП ФП и ТР-

Исправка: нанокатализатори на бази кобалта за процесе оксидације и хидрогенизације зелене боје

Исправка: нанокатализатори на бази кобалта за процесе оксидације и хидрогенизације зелене боје

Оригинални чланак објављен је 21. маја 2015. године Нат. Протоц. 10 , 916–926 (2015); објављено на мрежи 21. маја 2015; исправљено након штампања 16. септембра 2015 У верзији овог чланка која је првобитно објављена, Оквир 1 имао је погрешан наслов; тачан наслов је „Покуси рециклирања катализатора са нитробензеном: 30 х“. Грешка је исправљена (и за сам оквир и за одговарајући унос у одељку „Тајминг“) у ХТМЛ и ПДФ верзији чланка. Аутори Потражите Рајенахалли В Јагадеесх у: Часописи за истраживање природе • ПубМед • Гоогле зналца Потражите Тобиас